2
СОДЕРЖАНИЕ
стр.
ВВЕДЕНИЕ 6
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 11
1. Иерсиниоз - характеристика заболевания 11
1.1. Определение болезни, восприимчивость различных видов жи- 11 вотных и человека, распространение
1.2. Источник инфекции и пути передачи возбудителя 12
1.3. Клинические проявления заболевания 13
1.4. Лечение и профилактика исрсиниоза 15
1.5. Возбудитель кишечного иерсиниоза, его характеристика 16
1.5.1. История исследований микроорганизма 16
1.5.2. Морфолог ия возбудителя 17
1.5.3. Влияние температурного фактора на рост иерсиний 18
1.5.4. Культуральные и тинкториальные свойства 21
1.5.5. Чувствительность Y.enterocolitica к дезосредствам, антибио- 22 тикам, бактериофагам
1.5.6. Вирулентные свойства возбудителя иерсиниоза 23
1.5.7. Биохимические свойства, классификация по биоварам 28
1.5.8. Антигенное строение Y.enterocolitica, классификация по се- 29 роварам
1.5.9. Антигенные связи Y.enterocolitica 35
1.5.10. Антигенные связи Y.enterocolitica серовара 0:9 и Brucella 36
abortus л
3
1.6. Антигенная структура Brucella abortus 38
1.7. Диагностика иерсиниоза 41
1.8. Диагностика бруцеллёза 46
1.8.1. Серологическая диагностика бруцеллёза животных 47
1.9. Дифференциальная диагностика иерсиниоза, вызванного 51 Yersinia enterocolilica серовара 0:9, и бруцеллёза
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 56
2. Материалы и методы 56
3. Результаты исследований 77
3.1. Изучение культурально-морфологических, биохимических и 77 тинкториальных свойств штаммов иерсиний
3.1.1. Культуральные свойства эталонных штаммов иерсиний 77
3.1.2. Морфология иерсиний в S-, R- и SR- (RS-) формах 77
3.1.2.1. Морфология колоний 77
3.1.2.2. Морфология культуры в окрашенных мазках под 79 световым микроскопом
3.1.3. Биохимические свойства иерсиний 82
3.2. Селекция культур иерсиний различных сероваров в S- и R- 84 форме
3.3. Изучение влияния температуры выращивания и питательной 84 среды на диссоциацию кишечных иерсиний
3.4. Изучение влияния влажносги питательной среды на диссо- 86 циацию кишечных иерсиний
3.5. Изучение свойств культур Yersinia enterocolitica в S- и R- 87 форме
3.5.1. Изучение биохимических свойств иерсиний, находящих- 87 ся в S- и R-форме
3.5.2. Электрофоретическое исследование иерсиний в S- и R- 90 форме
3.6. Определение вирулентности референтных штаммов Yersinia 93 enterocolitica
3.7. Получение иерсиниозных гипериммунных сывороток 94
3.7.1. Разработка методики получения гипериммунных кро- 94 личьих сывороток на антигены 0:3 и 0:9 сероваров в S- и R- форме
3.7.2. Разработка метода получения гипериммунных кроличьих 99 сывороток против различных сероваров иерсиний в S-форме
3.7.3. Получение гипериммунных сывороток крупного рогатого 104 скота
3.8. Антигенные связи кишечных иерсиний 107
21
(экспозиция 30 минут) число микробных клеток (м.к.) Y. enterocolitica 0:3 составило: без покрова - 19x103; с покровом - 36x10^ (86).
1.5.4. Культуральные и тинкгориальные свойства
Yersinia enterocolitica - факультативный анаэроб. К питательным средам нетребовательны - хорошо растут на МПА, МПБ, агарах Хотгингера, Мак-Конки и Мартена. Несколько хуже растут на средах Эндо, Серова, Плоски-рева. Наблюдают рост на дезоксихолатном агаре и среде с бромтимоловым синим. Возбудитель способен расти на голодных средах - голодно-кислый агар, фосфатно-буферный раствор и т.д. (108, 124). Возможен рост в стерильной воде (64).
Оптимальная для роста pH среды 7,2-7,4, но бактерии могут размножаться как в умеренно кислой (pH 5,0-5,2), так и щелочной среде (pH до 8,0).
В жидких средах (МПЬ, бульон Хотгингера) иерсинии образуют равномерное помутнение. Динамика размножения исрсиний в питательной среде типична для любой бактериальной популяции и проходит фазы развития, лагфазу, стационарную фазу и фазу гибели, продолжительность которых зависит от температу рных условий выращивания (95, 108). На плотных питательных средах (МПА, агары Хотгингера, Эндо) при культивировании при 37°С через 24-48 часов образуют круглые полупрозрачные гладкие колонии размером от 0,1 до 1,0 мм. На среде с бромтимоловым синим через 24 часа иерсинии образуют круглые гладкие колонии голубого цвета, размером 0,1-0,2 мм и до 2,0 мм, через 48 часов, с фестончатым краем и выпуклым центром на темно-голубом фоне среды. При взятии петлей колонии легко сдвигаются по агару (124).
Kapperud G. et al. показали, что при выращивании на среде Игла с добавлением 10 % телячьей сыворотки и 0,1 % бикарбоната натрия, клинические штаммы Y. enterocolitica образуют множество отростков в виде фибрилл диаметром 1,5-2 нм и длиной 50-70 нм, что коррелировало с содержанием плаз-
22
миды вирулентности (pYV), аутоагглютинацией и маннозорезистентной ге-магглютинацией эритроцитов морской свинки (370).
Yersinia enterocolilica проявляет гемолитические свойства в бульоне с 2% -ной дефибринироваиной кровью (438).
Некоторые исследователи утверждают, что при культивировании на основных средах вирулентные штаммы Yersinia enterocolitica (сероваров 0:3, 0:8 и 0:9) могут образовывать при 37°С два типа колоний, причём более крупные, прозрачные и плоские не содержат плазмиду и проявляют сниженную вирулентность в опытах in vivo; культивирование на тех же средах при 25-26°С к подобной диссоциации не приводит (259, 371). Смирнов И.В. и Це-нева Г.Я. в своих исследованиях показали, что признак темпреатурозависи-мой морфологии колоний может быть дифференциальным, поскольку он характерен только для возбудителей иерсиниозов, которые при 37°С образуют на среде АГВ колонии достоверно меньшего диаметра, чем при 26°С и не превышающие 1 мм в диаметре (112,113).
При концентрации хлорида натрия до 5 % Yersinia enterocolitica растут хорошо, при 10% - в холодильнике выживает чаегь популяции, при 15 % -выживают только при 8-12°С (104).
1.5.5. Чувствительность Yersinia enterocolitica к дезосредствам, антибиотикам, бактериофагам.
Иерсинии восприимчивы к воздействию дезосредств. Для них губительны 1 % и 3 % раствор хлорамина, 3-5%-ный - карболовой кислоты и лизола, раствор сулемы в разведении 1:1000. Гибель иерсиний наступает через 5 и более минут. Раствор перманганата калия в концентрации 0,5-0,3 % вызывает гибель у бакгерий через 3 минуты. Чувствительны бактерии к перекиси водорода и дезинфектантам, в состав которых она входит. На микробы губительно действует прямая солнечная радиация, все кишечные иерсинии чувствительны к высыханию (41).
- Київ+380960830922