РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объем исследования и структура эксперимента.
В качестве объекта исследования использовали кроликов породы шиншилла обоего
пола массой 2,5±0,4кг. Выбор обусловлен подходящей величиной животных,
позволяющей проводить оперативные вмешательства на внепеченочных желчных путях,
устанавливать электроды в паренхиму печени и брать достаточное количество крови
для исследования. Кроме того, изменения, развивающиеся в печени и
желчевыводящей системе этих животных при обтурации желчной системы сходны, с
картиной, наблюдающейся при механической желтухе у человека. Отсутствие
агрессивности, делает кроликов очень удобными в хронических экспериментах.
Для решения поставленной цели и изучения влияния парентерального введения
озонированного изотонического раствора натрия хлорида и кровезаменителя с
функцией переноса кислорода «Перфторан» на уровень общих липидов в мембранах
эритроцитов и плазме крови, цитохимические показатели в нейтрофилах
периферической крови и напряжение кислорода (pО2) в печени животных при
механической желтухе было выполнено 37 опытов.
Для стандартизации результатов выполнена серия из 12 опытов (первая группа
животных) с инфузией 0,9% раствора натрия хлорида. На 14–15-е сутки после
моделирования механической желтухи за 2 часа до релапаротомии внутривенно
капельно со скоростью 6–10 мл/мин вводили изотонический раствор натрия хлорида
из расчета 5 мл/кг массы тела животного, после чего накладывали
холедоходуоденоанастомоз. Через 48 часов инфузию изотонического раствора натрия
хлорида повторяли.
Во второй группе (12 животных) на 14–15-е сутки после моделирования
механической желтухи за 2 часа до релапаротомии внутривенно капельно со
скоростью 6–10 мл/мин вводили свежеприготовленный (15 минут с момента
приготовления) озонированный изотонический раствор натрия хлорида с
концентрацией озона 1–1,5 мг/л, из расчета 5 мл/кг массы тела животного, после
чего накладывали холедоходуоденоанастомоз. Через 48 часов инфузию
озонированного изотонического раствора натрия хлорида повторяли.
В третьей группе (13 животных) на 14–15-е сутки после моделирования
механической желтухи за 2 часа до релапаротомии внутривенно капельно вводили
кровезаменитель с функцией переноса кислорода "Перфторан" из расчета 5 мл/кг
10% субмикронной эмульсии для внутривенного введения [7], после чего
накладывали холедоходуоденоанастомоз. Через 48 часов инфузию перфторана в дозе
5 мл/кг 10% субмикронной эмульсии повторяли.
Количественное распределение животных по группам представлено в табл. 2.1.
Таблица 2.1
Распределение животных по группам
при моделировании и лечении механической желтухи
Группа животных
Количество
I группа (с применением физиологического раствора)
12
II группа (с применением ОИР натрия хлорида)
12
III группа (с применением перфторана)
13
Всего
37
2.2. Моделирование механической желтухи.
Моделирование механической желтухи и печеночной недостаточности проводили
следующим образом: лабораторных животных вводили в наркоз путем
внутрибрюшинного введения этаминала натрия из расчета 30 мг/кг в условиях
спонтанного дыхания. Доступ к внепеченочным желчным путям осуществлялся путем
верхнесрединной лапаротомии. В междолевой щели по передней поверхности печени
устанавливали игольчатые платиновые электроды, для регистрации показателей
напряжения кислорода в ткани печени полярографическим методом. После
регистрации исходных данных производили холецистэктомию, выделяли общий желчный
проток в гепатодуоденальной связке, брали его на лигатуры, перевязывали в
супрадуоденальной области и пересекали. Рану послойно ушивали. На 14 –15-е
сутки животных вводили в наркоз путем внутрибрюшинного введения этаминала
натрия из расчета 30 мг/кг в условиях спонтанного дыхания, производили
релапаротомию, накладывали холедоходуоденоанастомоз на потерянном дренаже, рану
послойно ушивали.
2.3. Методы исследования в эксперименте.
Забор крови для исследования содержания общих липидов в мембранах эритроцитов и
плазме крови, цитохимического исследования активности дегидрогеназ и содержания
внутриклеточного гликогена в нейтрофилах периферической крови в обеих группах
проводили на 1, 3, 5, 7, 10 и 14 сутки моделирования механической желтухи и на
1, 3, 5, 7, 10, 14 и 21 сутки после восстановления пассажа желчи. Диагноз
острой печеночной недостаточности устанавливался на основании клинических
проявлений болезни и лабораторных исследований. Во всех группах проводили
комплексную базисную общепринятую терапию.
Статистическая обработка полученных данных проведена с использованием методов
вариационной статистики с вычислением средних величин (M) и оценкой вероятности
расхождений (m), достоверными считали показатели при P<0,05.
2.3.1. Цитохимические методы исследования. Содержание общих липидов в мембранах
эритроцитов и плазме крови определяли по методу В.Г. Колб, В.С. Камышниковой
(1986) [46]. Принцип этого метода основан на том, что продукты распада
ненасыщенных липидов образуют с реактивом, состоящим из серной, ортофосфорной
кислот и ванилина, соединение, интенсивность окраски которого пропорциональна
содержанию общих липидов в сыворотке крови. Оценку результатов производили на
фотоэлектрокалориметре КФК-2 при длине волны 500-560 нм в кювете с толщиной
слоя 5 мм против контрольной пробы. Для удобства анализа результатов
исследования, полученные данные выражали в условных единицах.
Метаболические характеристики клеток с проявлением их функциональных свойств и
структурных нарушений. Для этого выявляли активность комплекса дегидрогеназ –