ГЛАВА 2
ОБОСНОВАНИЕ ВЫБРАННЫХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
У всех обследованных детей проведено исследование соматического, неврологического статуса, состояния вегетативного гомеостаза. Применялись также общепринятые параклинические методы (общий анализ крови, мочи, исследование сахара и билирубина в крови).
Для углубленного изучения состояния нервной, ликворной и сердечно-сосудистой систем проведены исследования: нейросонография, эхоэнцефалография, электроэнцефалография, электрокардиография.
В соответствие с целью и задачами работы нами выбраны методы, отражающие исходный вегетативный тонус, вегетативную реактивность и вегетативное обеспечение деятельности (вегетативный гомеостаз), количественное и качественное исследование эритрограммы, состояние электролитного обмена.
Для определения вегетативного гомеостаза нами использован качественный метод исследования исходного вегетативного тонуса с помощью таблиц, адаптированных к детскому возрасту и количественный метод кардиоинтервалографии (КИГ), дающий возможность комплексно оценить исходный вегетативный тонус (стабильные характеристики вегетативных параметров в состоянии покоя) и вегетативную реактивность (вегетативные параметры при ортостатической нагрузке).
КИГ - метод анализа синусового сердечного ритма, отражает состояние адаптационных механизмов организма, направленных на поддержание гомеостаза.
Известно, что синусовый узел тесно связан с вегетативными центрами, вестибулярным аппаратом, мозжечком и корой больших полушарий [6,7,16].
Метод КИГ является не только высокоинформативным для изучения нейро-гуморальной регуляции организма, но также прост и доступен для технического исполнения у больных разных возрастных групп, в том числе детей младшего возраста.
Запись кардиоинтервалограмм проводилась во II отведении ЭКГ, регистрировалось 100 последовательных кардиоциклов (R-R) на одноканальном кардиографе. Регистрация проводилась утром в двух положениях: 1-ая-лежа на спине (после 10 мин. относительного покоя), 2-ая регистрировалась в положении стоя, сразу же после перехода в вертикальное положение.
Показатели вегетативного гомеостаза вычислялись по следующим параметрам:
Мо (мода)(сек) - наиболее часто встречающееся значение длительности интервалов R-R? характеризует уровень гуморальной регуляции сердечного ритма;
АМо (амплитуда моды) ( %) - число значений интервалов, равных Мо в % к общему числу зарегистрированных кардиоциклов? отражает степень активности симпатической иннервации сердечного ритма;
?? (сек.) - разница между максимальным и минимальным значением длительности зарегистрированных интервалов R-R? характеризует уровень активности парасимпатической иннервации сердечного ритма;
ИН (индекс напряжения) (услов. един.) - рассчитывается по формуле: ИН = АМо/2 ? Мо ? ?X? информирует о степени напряжения компенсаторных механизмов организма.
Исходный вегетативный тонус (ИВТ) оценивался по ИН 1. Так, эйтония (сбалансированное состояние регуляторных систем вегетативной иннервации) соответствует 30-90 услов. ед.; ваготония - меньше 30 услов. ед.; симпатикотония от 90 до 160 услов. ед.; гиперсимпатикотония - более 160 услов. ед. (перенапряжение регуляторных систем).
Вегетативная реактивность (ВР) определялась по отношению ИН2/ИН1 (на ортостатическую пробу). Нормальная реактивность (эйтония) расценивалась при увеличении ИН 2 по сравнению с ИН 1 в 1-3 раза; симпатикотоническая реактивность - от 0,7 до 1,5 раз; гиперсимпатикотоническая реактивность, если показатель больше, чем в 1,5-2 раза; асимпатикотоническая реактивность - менее 0,7 раз.
При оценке динамических показателей КИГ учитывался закон гомеостаза об исходном уровне (закон "начального значения" Уайлдера) - чем выше уровень исходной активности физиологического состояния, тем меньше относительное изменение этого уровня при воздействии импульсов одной и той же интенсивности.
Таким образом, метод кардиоинтервалографии (КИГ) позволил определить основные параметры состояния вегетативной иннервации: исходный вегетативный тонус и вегетативную реактивность. Определение вегетативного обеспечения деятельности у детей данной возрастной группы не представлялось возможным.
Для изучения строения поверхности и формы эритроцитов наиболее информативным методом является сканирующая (растровая) электронная микроскопия (СЭМ). Возможность изучения трехмерного изображения при высокой разрешающей способности с последующей количественной оценкой различных форм эритроцитов определяет большой интерес к применению этого метода для изучения эритрограмм.
После взятия внутривенно (2 мл) крови у исследуемых проводилась подготовка эритроцитов для сканирующей электронной микроскопии по методу Г.И.Козинца (1980) и I.A. Clarкe, A.I. Salsbury (1967).
Кровь центрифугировали в течение 10 мин. со скоростью 1000 об./мин. с последующей фиксацией в 2,5 % растворе глютарового альдегида в течение 1 часа при комнатной температуре и промыванием забуферным фосфатным раствором. Затем проводилась постфиксация 1 % раствором четырехокиси осмия в течение 30 мин. при комнатной температуре с последующим обезвоживанием в серии водных растворов ацетона восходящей концентрации (30, 50, 70, 90, 100 %).
Суспензию клеток наносили на подложки из латуни, высушивание проводили на воздухе. Перед просмотром образцы напыляли золотом в вакуумной напылительной установке. Анализ и фотографирование препаратов производили в сканирующем электронном микроскопе ISM - 35 с разрешающей способностью 25 кВ (Япония) с увеличением от x 3000 до x 2000 раз.
Форму эритроцитов анализировали качественно и количественно. В зависимости от формы и величины эритроцитов были выделены следующие типы [54, 109]: дискоциты (рис.2.1), стоматоциты (рис.2.2), эхиноциты (рис.2.4), книзоциты (рис.2.3), сфероциты и дегенеративно-деструктивные (рис.2.5).
Уровень электролитов (кальций, калий, магний, натрий) определялся методом атомно-абсорбционной спектрофото