РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Экспериментальные исследования
Всего по теме диссертации было выполнено 2080 биохимических исследований на 104 белых крысах в возрасте 1,5-4,5 месяца. Животные содержались на стандартном рационе (белок 14,25 %; клетчатка 4,4 %; кальций 1,52 % фосфор 0,63 %). Из этого количества крыс 30 животных содержались с одномесячного возраста на низкокальциевом рационе, состоящем из кукурузной дерти и кормовой свеклы. С таким рационом каждая крыса получала в сутки лишь 7 мг кальция, тогда как контрольные крысы получали ежедневно с кормом 70 мг этого элемента.
У 64 крыс воспроизводили перелом нижней челюсти. Для этого у животных под наркозом выстригали в области нижней челюсти шерсть, обрабатывали кожу спиртом и 3%-ным раствором йода. Разрез кожи и подкожной клетчатки делали длиной 0,5-1 см, рассекая поверхностную фасцию до угла нижней челюсти. Экспериментальный перелом воспроизводили ножницами между первым и вторым молярами. После этого рану послойно зашивали кетгутом, а кожу капроновой нитью.
В экспериментальных исследованиях были использованы следующие препараты:
* цитрат кальция (лимоннокислый кальций) с содержанием кальция 17,4 % в виде препарата "Кальцит", в одной таблетке которого содержание кальция составило 100 мг;
* сульфат цинка (ZnSO4?7H2О) с содержанием цинка 22,7 % или цитрат цинка (1 моль цинка окиси на 1 моль лимонной кислоты) с содержанием цинка 20,6 %;
Все препараты производства НПА "Одесская биотехнология", сульфат цинка ? фармакопейный.
Животные получали все препараты перорально в виде водных растворов или суспензий в объеме 1 мл из расчета на 1 кг живой массы, 30 или 43 мг кальция, 1 мл цинка .
Введение препаратов осуществляли в течение месяца.
Умерщвление животных осуществляли под мягким эфирным наркозом путем декапитации.
Извлекали нижнюю челюсть, бедренную и большеберцовые кости. Для исследования брали очаг перелома нижней челюсти, диафиз трубчатых костей, из которых готовили гомогенаты из расчета 100 мг/мл. Все ткани хранили до исследования при -200С (табл. 2.1, 2.2).
2.2. Клинические исследования
Под наблюдением и на лечении находилось 50 больных с переломом нижней челюсти. Возраст больных - 19-73 года.
Больным с ПНЧ проводилась ручная репозиция фрагментов нижней челюсти. Иммобилизация осуществлялась с помощью двучелюстной гнутой проволочной шины с зацепными петлями и эластическим вытяжением. После контрольной рентгенограммы использовали комбинированный метод репозиции ?101? или остеосинтез с применением накостных минипластин. По показаниям (наличие гематомы, признаки воспалительной реакции в месте перелома) пациенты получали противовоспалительную и
Таблица 2.2.
Определение влияния кальция и цинка
на ферментативные показатели ткани нижней челюсти
после ее перелома (74 белые крысы в возрасте 2 месяцев)
Группы исследованныхВремя в экспериментеИсследуемые показателиЩелочная фосфатаза (ЩФ) [1]Кислая
Фосфатаза (КФ) [1]КФ/ЩФ1. Интактные животные1 мес.+++2 мес.+++П. Перелом нижней челюсти1 мес.+++2 мес.+++Ш. Перелом нижней челюсти + цитрат кальция1 мес.+++2 мес.+++1У. Перелом нижней челюсти + цитрат цинка1 мес.+++2 мес.+++У. Перелом нижней челюсти + цитрат кальция + цитрат цинка1 мес.+++2 мес.+++У1. Перелом нижней челюсти + цитрат кальция + цитрат цинка + лимонная кислота (соотношение 30:1:10)1 мес.+++2 мес.+++
Примечание: [1] - по Левицкому А.П. и соавторам [106].
антибактериальную терапию. Зуб из щели перелома удалялся, если он являлся причиной хронического воспалительного процесса.
21 больной в дополнение к проводимому ортопедическому, хирургическому и комбинированному лечению получал кальций и цинксодержащие препараты.
I группа больных с ПНЧ дополнительно к базовому лечению получала кальцит по 5 таблеток в день. II группа больных получала по 2 таблетки в день цинксодержащего препарата "Цинктерал" ("Polfa"). III группа больных с ПНЧ получала по 5 таблеток Кальцита и по 2 таблетки Цинктерала в день. лечение препаратами продолжали три недели (20 дней).
Функциональную активность слюнных желез у пациентов определяли по показателям нестимулированной и стимулированной саливации ?Левицкий А.П., 1974; 107?. Нестимулированную саливацию оценивали после сбора слюны путем сплевывания в течение 5 минут в мерные центрифужные пробирки, охлажденные льдом. Стимулированную саливацию оценивали после сбора слюны вышеуказанным методом, предварительно, за 40 минут осуществив стимуляцию слюноотделения путем приема 10 капель 1%-ного пилокарпина на 50 мл водопроводной воды. Сбор слюны у пациентов осуществляли только натощак при поступлении в клинику и спустя 20 дней.
2.3. Лабораторные исследования
В слюне, сыворотке крови и гомогенатах изучаемых тканей определяли содержание белка методом Lowry O.H. и соавторов ?108? в модификации Левицкого А.П. и Стефанова А.В. ?103?, активность эластазы по скорости гидролиза ВОС-L-аланин-р-нитрофенилового эфира, активность катепсина D по скорости гидролиза гемоглобина при рН 3,5 методом Ансона ?104?, общую протеолитическую активность (ОПА) по гидролизу казеина при рН 7,6 методом Кунитца в модификации Левицкого А.П. и соавторов ?105?.
Активность щелочной и кислой фосфатаз определяли по скорости гидролиза р-нитрофенилфосфата методом Bessey ?109? в модификации Левицкого А.П. и др. ?106?.
Плотность бедренной кости крыс определяли весовым методом в соответствии с указаниями Леонтьева В.К. и Петровича Ю.А. ?102?.
Концентрацию кальция в слюне и сыворотке крови определяли на спектрофотометре СФ-26 с помощью стандарт