РОЗДІЛ 2. МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
Досліди проводили на білих безпородних щурах-самцях масою 180-380 г і
мишах-самцях масою 18-32 г. Тварин утримували на стандартній лабораторній дієті
при природному світловому циклі. Тваринам контрольних груп у відповідних
об'ємах вводили фізіологічний розчин. Досліджувані водорозчинні речовини
вводилися внутрішньоочеревинно в ізотонічному (0,9%) розчині NaCl, а нерозчинні
у воді – в емульсії з розчинником Tвін-80. У роботі використано 750 мишей і 400
щурів.
У ході роботи використовувались сполуки похідні 1,4-бенздіазепіну і
1,3,4-бензтриазепіну – гетероаналоги 1,4-бенздіазепінів, а також препарати
похідні 1,4-бенздіазепіну: гідазепам, феназепам, альпразолам. Ці сполуки були
синтезовані у Фізико-хімічному інституті НАН України ім. О.В. Богатського НАН
України у відділі медичної хімії (зав. відділом академік НАН України С.А.
Андронаті, директор Фізико-хімічного інституту ім. О.В. Богатського НАН
України).
Дослідження проводились у порівнянні з відомими препаратами: ноотропілом у дозі
400 мг/кг ("Пліва", Краків) і гіпнотиком третього покоління – зопіклоном у
дозах 7,5, 5, 2,5 мг/кг (Рон-Пуленк Рорер, Франція).
У ході досліджень використовувались наступні реактиви: Твін-80 – фірма "FERAK"
(Німеччина); як судомний агент використовували коразол (пентилентетразол) –
об'єднання "Мосхімфармпрепарати"; етамінал натрію – фірма "SIGMA" (США).
Статистичну обробку отриманих даних проводили за допомогою програми Microsoft
Excel за методом обчислення середнього арифметичного та його рівня значимості
за критерієм достовірності Стьюдента при Р=0,05 % [105, 106].
Нижче наведено докладний опис використаних методик.
Методи, які застосовувались у роботі
Вивчення орієнтовно-дослідницької поведінки за методом "відкритого поля" у
дослідах на мишах [107]
Методику “відкритого поля” застосовують для оцінки орієнтовно-дослідницької
поведінки щурів і мишей. Установка представляє собою камеру розміром 60 ґ 60 см
для мишей і 80 ґ 80 см для щурів з прозорою кришкою. Підлога камери рівномірно
розділена на 9 квадратів з 16 отворами діаметром 2 см для мишей і 3 см для
щурів. Кількість тварин у групі повинна складати від 8 до 10. Під час
перебування тварин у відкритому полі (2 хв для мишей і 3 хв для щурів)
реєстрували показники рухової активності: ВА (вертикальна рухова активність)
число вставань на задні лапи; ГА (горизонтальна рухова активність) кількість
переходів із квадрату у квадрат; ДП (дослідницька поведінка) число зазирань в
отвори; ЗРА (загальна рухова активність) – це сума усіх видів активності:
ВА+ГА+ДП.
Вивчення анорексигенної активності за методом Мілани Дезубе у дослідах на щурах
[108]
Щурів протягом двох тижнів утримують на рідкій дієті. Потім за день до
експерименту щурам вводять внутрішньоочере-винно розчин 0,9% NaCl. Тварин
допускають до рідкої їжі через кожні 30 хв протягом трьох годин. Контрольні
щури повинні вживати в середньому за 30 хв 8 мл рідкого корму. На наступний
день після двох годин депривації щурам контрольної групи внутрішньоочеревинно
вводять фізіологічний розчин (0,9% NaCl), а щурам експериментальної групи
вводять розчин досліджуваної речовини. Через 30 хв після введення сполуки щурів
допускають до рідкої їжі. Кількість вжитої їжі фіксують кожні 30 хв протягом
трьох годин. Всі показники підсумовують, знаходять середнє арифметичне значення
і порівнюють його з контрольними показниками. Ефект виражають у відсотках за
відношенням до контролю.
Вивчення протисудомної активності за методом "антагонізму з коразолом" у
дослідах на мишах [107]
Антагонізм з коразолом оцінювали у дослідах на мишах за здатністю сполук
попереджувати тоніко-клонічний компонент судорожного нападу і смерть тварин.
Коразол у дозі 130 мг/кг (ЕД95 –доза, що здатна викликати клонічні судоми і
смерть 95% тварин) вводили підшкірно за 10 хвилин до прояву максимального
ефекту досліджуваних речовин. Наявність судом і кількість загиблих тварин
реєстрували протягом 40 хв після введення коразолу. Кількість тварин у дослідах
складала 6.
Вивчення антидепресивної активності за методом "форсованого плавання" за
Порсолтом у дослідах на мишах [109]
Антидепреcивну активність оцінюють за методом “поведінкового відчаю” за
Порсолтом, який ефективно використовується для скринінгу як типових, так і
атипових антидепресантів.
Вказаний метод призначений для створення стресового стану у мишей шляхом
примусового плавання. Експериментальних тварин по черзі поміщують у вузький
циліндр діаметром 10 см, висотою 25 см. Циліндр заповнюють на 1/3 водою з
температурою 23-24°С. Вплив препарату оцінюють за зменшенням тривалості поз
імобілізації тварин у порівнянні з контрольними значеннями. Поведінку тварин
реєструють протягом 4,5 хвилин після двохвилинної акліматизації.
Вивчення впливу на пам'ять за методом "дискримінації образів у просторі" або
"сприйняття новизни" за Мегенсом у дослідах на щурах [110]
Тваринам демонстрували протягом 3 хв два ідентичні об’єкти у звичних для них
умовах (ознайомлення). Після цього тваринам негайно вводили перорально
досліджувані сполуки і повертали їх до клітки, в якій вони до цього
знаходилися. Після двохгодинного інтервалу (120 хвилин) тваринам знову
демонстрували два об’єкти, один з яких був уже знайомим, баченим протягом
першої демонстрації, а другий цілком новий – незнайомий. Коефіцієнт
дискримінації (DI) розраховували за формулою, наведеною в роботі [109]:
(2.1)
N – час обстеження тваринами нового об'єкту;
О - час обстеження тваринами старого об'єкту
У випадку доброї здатності пригадувати DI виходить позитивним.
- Київ+380960830922