РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Исследования по теме диссертационной работы выполнены в период 2001-2005 г. в лаборатории изучения болезней молодняка Национального научного центра "Институт экспериментальной и клинической ветеринарной медицины" (ННЦ "ИЭКВМ") и хозяйствах Харьковской, Житомирской и Полтавской областей, а также опытных хозяйствах Института животноводства УААН (г. Харьков). В хозяйствах изучали этиологические факторы акушерско-гинекологических патологий, распространение и причины заболеваний коров, анализировали схемы лечебных и профилактических мероприятий, применяемые в хозяйствах и определяли их эффективность.
От коров с различным физиологическим и клиническим статусом из половых органов отбирали пробы экссудата и кровь для изучения показателей, характеризующих уровень резистентности.
Межлабораторные комиссионные испытания проводили на базе ННЦ "ИЭКВМ".
2.1 Материалы исследований
Питательные среды для культивирования выделяемых микроорганизмов: мясопептонный бульон (МПБ) (рН=7,2-7,4), мясопептонный агар, мясопептонный агар (МПА) с добавлением 5 % дефибринированной крови барана, мясопептонный агар с добавлением 10 % NaCl (МПБ с 10 % NaCl), МПБ с 6,5 % NaCl, агар Эндо, висмутсульфит агар (ВСА), среды Гисса, зарубежные коммерческие тест системы для экспресс диагностики стафилококков и энтеробактерий (MIKRO-LA-TEST "ENTEROtest 16" PLIVA-Lachema CZECH REPUBLIC), (MIKRO-LA-TEST "STAPHYtest 16" PLIVA-Lachema CZECH REPUBLIC).
Кровь животных для клинико-иммунобиохимических исследований: от стельных коров, от коров больных острыми эндометритами, от коров больных хроническими эндометритами.
Сыворотки крови: контрольные сыворотки из "Набора для серологической диагностики E. сoli" (г. Армавир); полевые сыворотки крупного рогатого скота - 105 проб; гипериммунные сыворотки кроликов - 52 пробы; иммунные сыворотки белых мышей - 300 проб; иммунные сыворотки коров - 197 проб.
Пробы экссудата влагалища коров: от стельных коров - 30 проб; от коров больных острыми эндометритами - 60 проб; от коров больных хроническими эндометритами - 30 проб.
Лабораторные животные: не линейные белые мыши, массой 18-20 г - 2790 голов, кролики массой 2,5-4 кг - 52 головы.
Экспериментальные животные: стельные коровы - 197 голов, коровы в послеродовом периоде - 722 головы, коровы больные острыми эндометритами - 100 голов, коровы больные хроническими эндометритами - 74 головы.
Для изучения клинических и биохимических показателей крови коров, больных акушерско-гинекологическими патологиями, использовали сыворотки крови 108 коров. Также использовали сыворотки крови 197 вакцинированных коров (107 опытных и 90 контрольных) и пробы крови от 52 кроликов.
Культуры микроорганизмов: происследовано 384 культуры.
Производственные штаммы микроорганизмов:
?) Производственный штамм Escherichia coli № 3, используемый для производства и контроля активности вакцины субъединичной инактивированной для профилактики послеродовых эндометритов коров - (ТУ У 24.4-00497087-067:2007), представляющий подвижные палочки с закруглёнными концами, которые не образуют спор и капсул, окрашиваются грамотрицательно, выдерживают оптимальный режим культивирования при температуре + 37-38 °С 24 часа; при росте на мясопептонном агаре образуют колонии 1-4 мм в диаметре, прозрачного либо сероватого цвета. На среде Эндо образуют круглые колонии с ровными краями малиново-красного цвета без металлического блеска. На питательных средах ферментируют лактозу, маннит, сорбит, арабинозу, дульцит, глюкозу с образованием газа, дают положительную реакцию с метиловым красным. Не утилизируют цитрат натрия, не обладают цитохромоксидазной активностью, не образовывают сероводород и дают отрицательную реакцию Фогеса-Проскауэра. Производственный штамм имеет соматический антиген - О 199.
Производственный штамм эшерихий № 3 является вирулентным для белых мышей и вызывает их гибель при парентеральном введении животным 6,0?109 микробных клеток суточной культуры эшерихий.
Производственный штамм эшерихий синтезирует термолабильный экзотоксин и ?-гемолизины, которые обладают антигенными и иммуногенными свойствами. Двукратная иммунизация мышей с интервалом 14 суток инактивированным антигеном в дозе 25?109 м. к./см3 в объёме 0,5 см3 обеспечивает защиту 70 % вакцинированных животных при заражении их гомологичными штаммами в дозе 5?LD100, а также выработку специфических антител в пределах 4-5 lоg2.
??) Производственный штамм Proteus vulgaris № 2, используемый для производства и контроля активности вакцины инактивированной субъединичной для профилактики послеродовых эндометритов коров (ТУ У 24.4-00497087-067:2007) - представляет собой подвижные палочки с закруглёнными концами, который спор и капсул не образует, окрашивается грамотрицательно, оптимальный режим культивирования - при температуре + 37-38 °С.
Штамм на МПБ давал равномерное помутнение среды. На МПА он образует колонии типа "покрывало", т. е. обладает ползучим ростом. На агаре Эндо дает равномерное зарастание всей среды колонией белого цвета. Штамм дает отрицательную реакцию на наличие цитохромоксидазы, ферментирует глюкозу, не ферментирует лактозу, сахарозу, мальтозу, маннит, сорбит, арабинозу, дульцит, не утилизирует цитрат натрия, не образует сероводород, не образует галактозидазу. Имеет фенилаланиндезаминазу и желатиназу, образует уреазу, образует индол.
Вакцинный штамм протея является вирулентным для белых мышей, и вызывает их гибель при парентеральном введении животным 4,2?109 микробных клеток суточной культуры протея.
Производственный штамм протея синтезирует термостабильный эндотоксин и ?-гемолизин, которые обладают антигенными и иммуногенными свойствами. Двукратная иммунизация мышей в объёме 0,5 см3 с интервалом 14 суток инактивированным антигеном в дозе 35?109 м. к./см3 обеспечивала защиту 70 % вакцинированных животных при заражении их гомологичными штаммами в дозе 5?LD100, а также выработку специфических антител в пр
- Київ+380960830922