ЗМІСТ
ПЕРЕЛІК УМОВНИХ ПОЗНАЧЕНЬ
ВСТУП
РОЗДІЛ 1. ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ
1.1. Пухлинні антигени, їх класифікація та роль в
імунотерапії онкозахворювань
1.1.1. Методи пошуку пухлинних антигенів та маркерів
1.2. Молекулярні особливості раку яєчника; механізми
злоякісного переродження епітеліальних клітин яєчника
1.3. Відомі маркери раку яєчника
1.3.1. Антиген МХ як маркер раку яєчника; aнтитіла МХ
та їх терапевтичний потенціал у лікуванні раку яєчника
1.3.2. Фосфатний транспортер NaPib як потенційний пухлинний маркер
1.3.2.1. Структура та функції Na-залежних фосфатних транспортерів
родини SLCА
1.3.2.2. Експресія фосфатного транспортеру NaPib в тканинах та органах
1.3.2.3. Фактори, що беруть участь у регуляції роботи транспортеру
NaPib
РОЗДІЛ 2. МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ
2.1. Матеріали та обладнання
2.2. Плазміди, штами та клітинні лінії
2.3. Скринінг кДНК-бібліотеки клітин OVCAR- антитілами MX
2.3.1. Процедура in vivo excision
2.3.2. Біоінформаційний аналіз кДНК позитивних клонів
2.4. Методи роботи з нуклеїновими кислотами
2.4.1. Дизайн олігонуклеотидів
2.4.2. Ампліфікація ДНК за допомогою полімеразної ланцюгової реакції
2.4.3. Електрофорез та очищення фрагментів ДНК з гелю
2.4.4. Рестрикція та лігування фрагментів ДНК
2.4.5. Виділення плазмідної ДНК
2.4.6. Виділення сумарної РНК з препаратів пухлин
2.4.7. Синтез кДНК на РНК матриці
2. 5. Експресія рекомбінантних білків у бакуловірусній системі
2.5.1. Клонування у вектор pFASTBac та отримання бакміди
2.5.2. Інфікування клітин комах
2.5.3. Отримання вірусного стоку та визначення титру
2.5.4. Продукція рекомбінантного білка в клітинах комах
2.6. Методи роботи з клітинами E.coli
2.6.1. Поживні середовища для росту бактерільних клітин
2.6.2. Отримання компетентних клітин Е. coli
2.6.3. Трансформація бактеріальних клітин
2.6.4. Індукція експресії рекомбінантних білків в клітинах E. coli
2.7. Методи роботи з білками
2.7.1. Електрофорез білків в ПААГ у денатуруючих умовах
2.7.2. Визначення концентрації білка за методом Бредфорда
2.7.3. Очищення GST-злитих білків методом афінної хроматографії
на глататіон-сефарозі
2.7.4. Очищення His-злитих білків методом афінної хроматографії
на Ni-NTA агарозі
2.7.5. Очищення рекомбінантних білків методом електроелюції з ПААГ
2.8. Імунологічні методи
2.8.1. Вестерн-блот аналіз
2.8. 2. Виснаження антитіл MX рекомбінантним білком NaPib
2.8.3. Імуногістохімічний аналіз
2.8.4. Отримання моноклональних антитіл
2.8.5. Імунопреципітація
2.9. Культура клітин ссавців
2.9.1. Культивування клітин ссавців ліній OVCAR, SKRC,
SKRC, HEK
2.9.2. Тимчасова трансфекція HEK
2.9.3. Стабільна трансфекція HEK
2.9.4. Приготування лізатів еукаріотичних клітин
РОЗДІЛ 3. ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНА ЧАСТИНА
3.1. Ідентифікація антигену MX
3.1.1. Скринінг кДНК-бібліотеки клітин OVCAR- антитілами МХ
3.1.2. Аналіз кДНК позитивних клонів. Ідентифікація
нуклеотичдних послідовностей з використанням
бази GenBank
3.1.3. Порівняльний аналіз біохімічних характеристик антигену МХ
та NaPib. Гіпотетична топологічна модель NaPib
3.2. Підтвердження ідентичності антигену МХ та транспортеру
NaPib
3.2.1. Детекція рекомбінантного NaPib (- а.к.), синтезованого в
клітинах бактерій, антитілами МХ 3.2.2. Детекція рекомбінантного NaPib
(- а.к.), синтезованого в
клітинах комах, антитілами МХ
3.2.3. Детекція повнорозмірного NaPib, синтезованого в клітинах ссавців,
антитілами МХ
3.2.4. Імуногістохіміний аналіз зразків раку яєчника антитілами
MX, виснаженими рекомбінантним білком NaPib
3.3. Пошук ділянки, що містить епітоп, який розпізнається антитілами
МХ
3.3.1. Схема пошуку епітопу МХ. Детекція ділянок позаклітинного
домену NaPib антитілами МХ
3.4. Отримання та характеристика моноклональних
антитіл проти позаклітинного домену NaРib (- а.к.)
3.4.1. Імунізація мишей, генерування та селекція гібридомних клонів
3.4.2. Перевірка специфічності моноклональних антитіл проти NaРib
3.4.3. Визначення ізотипів моноклональних антитіл проти NaPib
3.4. 4. Пошук ділянки, що містить епітоп, який розпізнається антитілами проти
NaPib
3.5. Дослідження експресії гена фосфатного транспортера NaPib на
рівні білка в пухлинах яєчника епітеліального
походження
3.5.1. Вестерн-блот аналіз зразків пухлин яєчника з використанням
антитіл проти транспортера NaPib
3.5.2. Імуногістохімічний аналіз транспортера NaPib
у зразках пухлин яєчника
3.5.3. Імуногістохімічний аналіз транспортера NaPib в епітелії
фаллопієвих труб, ендометрії та ендоцервікальному епітелії
3.5.4. Аналіз експресії SLCA у зразках пухлин яєчника
методом ЗТ-ПЛР
РОЗДІЛ 4. АНАЛІЗ І УЗАГАЛЬНЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ
ВИСНОВКИ
СПИСОК
- Київ+380960830922