РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Настоящее исследование состоит из двух разделов. В первом разделе в эксперименте проведено сравнительное морфологическое и имунно-морфологическое исследование течения раневого процесса гнойной раны в зависимости от эмоциональной устойчивости экспериментальных животных в динамике лечения, а также изучение морфологических и имунно-морфологических изменений во внутренних органах (печени, почках, селезенке, тимусе,надпочечниках) на фоне гнойной раны.
Во втором разделе изучены особенности течения ГВП мягких тканей ЧЛО у больных с различным психо-эмоциональным статусом.
2.1. Материалы и методы экспериментального исследования
Работа проводилась на самцах инбредной линии крыс WAG/G Lac Sto (Wistar albino Glaxo) и рандомбредной линии Mc Dawel массой 180-200 г [211, 212]. Животные содержались в соответствии с нормами GLP. Исследования проводились согласно стандартам GLP [211, 212]. До начала экспериментов животных в течение 1-2 недель выдерживали в виварии на обычном пищевом рационе по 10-20 особей в стандартных металлических клетках. Для исключения влияния сезонных и суточных колебаний на изучаемые показатели основные исследования были проведены в осенне-зимний период в утренние часы. Умерщвление животных проводилось в соответствии с требованиями GLP [211, 212].
Для осуществления поставленной цели был проведен эксперимент на 25 половозрелых белых крысах линии Вистар и 18 рябых эмоционально неустойчивых крысах рандомбредной линии Mc Dawel. Животные были разделены на 3 группы: 1 группа - контрольная (7 интактных крыс); 2 группу составили 18 крыс линии Вистар, которым моделировался внутримышечный абсцесс на бедре путем введения в рану 1 мл микробной взвеси, содержащей 16 млрд. колониеобразующих единиц (КОЕ): 8 млрд. Staphylococcus aureus ATCC № 25923 (F-49) и 8 млрд. Streptococcus pyogenes 653 штамм Dick-1 с последующим лечением 30 % раствором линкомицина в дозе 150 мг 2 раза в день внутримышечно; 3 группу составили 18 рябых эмоционально неустойчивых крыс, которым также моделировался внутримышечный абсцесс с последующим лечением 30 % раствором линкомицина в дозе 150 мг 2 раза внутримышечно.
Для морфологического исследования (табл.2.1) на 1 (после однократного введения 150 мг линкомицина за 2 часа до забоя), 3 и 7 сутки раневого процесса животных выводили из эксперимента и из послеоперационной раны, внутренних органов (печени, почек, селезенки, тимуса, надпочечников) высекались участки ткани размером 1,0х0,5х0,5 см, Материал фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина, заливали в парафин, после чего готовились серийные срезы толщиной 5-6 мкм. Обзорные препараты, окрашенные гематоксилином и эозином, использовались для общей оценки состояния исследуемых тканей. Окрашивание препаратов фукселеном на эластические волокна по Вейгерту с докрашиванием пикрофусином по методу ван Гизон использовалось для выявления и дифференцировки соединительно-тканных структур. Для оценки функциональной активности регенерирующих тканей использовали комплекс гистохимических методик. Дезоксинуклеопротеиды (ДНП) выявляли реакцией по Фельгену-Россенбеку (контроль - гидролиз с HCl). Рибонуклеопротеиды (РНП) выявляли окраской по методу Браше (контроль кристаллической рибонуклеазой). С помощью ШИК-реакции по Мак Манусу Хочкису (контроль с амилазой) выявляли нейтральные гликозаминогликаны (ГАГ), а Хейл-реакцией с толуидиновым синим - кислые ГАГ (контроль по В.В.Виноградову и Б.Б.Фиксу). Гистологические и гистохимические методики выполнялись по прописям, изложенным в руководствах по гистологической технике и гистохимии.
Иммуноморфологическое исследование проводили на парафиновых срезах, толщиной 5-6 мкм непрямым методом Кунса по методике Brosman. Иммунные клетки дифференцировали с помощью моноклональных крысиных антител (МКА) к различным типам клеток фирмы Serotec. Использовали CD8, CD4, CD3, CD18, CD45RA, ED1, IgM, IgG, ИЛ-1?, ИЛ-6, ФНО, ИЛ-2RL, ИЛ-4. Коллагены типировали моноклональными антителами (МКА) к коллагенам I, III, IV и V типов. Рецепторы к эндотелину определяли с МКА к эндотелину. В качестве люминисцентной метки использовали F (ab)- 2 - фрагменты кроличьих антител против иммуноглобулинов мыши, меченных ФИТЦ. Препараты изучали в люминисцентном микроскопе МЛ-2 с использованием светофильтров: ФС-1-2, СЗС-24, БС-8-2, УФС-6-3. Относительные объемы основных клонов имунных клеток определяли с помощью сетки Г.Г.Автандилова в люминисцентном микроскопе. Цифровые данные обрабатывали методами вариационной статистики.
Таблица 2.1
Распределение крыс по группам и срокам выведения из опыта
СерияСроки, сутки1-е3-и7-еI интактные
животные7--II эмоционально-неустойчивые666III эмоционально-
устойчивые666 2.2 Материалы и методы клинических исследований
2.2.1. Общая характеристика обследованных больных. Нами было обследовано 120 больных с гнойно-воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области различной локализации. Все больные проходили стационарное лечение в клинике челюстно-лицевой хирургии Харьковской областной клинической больницы в 2001-2003 гг. Больные, имевшие сопутствующую или фоновую патологию, в исследование не включались.
Среди обследованных больных количество женщин составило 36, а мужчин - 84 человека (30 % и 70,0 % соответственно).
Возраст больных находился в пределах от 18 до 60 лет. В группе женщин количество больных от 18 до 20 лет составило 4 человека, от 21 до 30 лет - 10 человек, от 31 до 40 лет -7 человек, от 41 до 50 лет - 6 человек, и от 51 до 60 лет - 9 человек. В группе мужчин количество больных от 18 до 20 лет составило 6 человек, от 21 до 30 лет - 25 человек, от 31 до 40 лет - 21человек, от 41 до 50 лет- 15 человек, от 51 до 60 лет- 17 человек. Распределение больных с учетом возраста приведено в сводной таблице 2.2.1. Как видно, среди больных с гнойно-воспалительными забо